论文标题:重组轮状病毒VP4抗原的表达及免疫原性研究
Expression and Immunogenicity Research of Recombinant Rotavirus VP4 Antigen
论文作者
论文导师 孙茂盛,论文学位 博士,论文专业 生物化学与分子生物学
论文单位 中国协和医科大学,点击次数 115,论文页数 125页File Size5578K
2004-06-01论文网 http://www.lw23.com/lunwen_126819152/
rotavirus VP4 gene; recombinant adenovirus; gene modification; antibody levels; passive protection;γinterferon; rotavirus NSP4 gene
由于轮状病毒(Rotavirus，RV)引起的婴幼儿腹泻至今没有特效治疗药物，因此研制疫苗仍是预防该疾病的热点。目前轮状病毒疫苗的研制有减毒活疫苗，基因工程亚单位疫苗，遗传重组疫苗，核酸疫苗以及基因工程载体疫苗。无论何种形式的疫苗，其目的都是要刺激机体产生特异性免疫反应。作为消化道感染性疾病，特别希望能诱导局部分泌性免疫。本论文就轮状病毒重要中和抗原(Viral Protein 4，VP4)基因做了基因修饰，及原核和真核系统的表达研究；对修饰后表达产物免疫原性进行了评价。 VP4是轮状病毒的外壳蛋白，具有血凝素、病毒吸附、决定病毒毒力等多种功能。我们的研究选择了轮状病毒SA11株VP4基因作为目的基因。SA11株的VP4基因长度为2363个碱基对(bp)，成熟蛋白有776个氨基酸(aa)，分子量为87kD左右。为了探讨提高抗原免疫原性的可能性，我们通过两种方式修饰了VP4基因。第一种修饰是在VP4基因的5′端引入来自于小鼠IgH链的分泌信号肽序列SG(139bp)，记为SG-VP4，目的是为了使野生型VP4基因获得糖基化；第二种修饰是除在5′端引入信号肽序列，还在VP4基因3′端引入来自人HLA Ⅰ类分子α链的3′端部分TM(750bp)，记为SG-VP4-TM，目的是使获得糖基化的VP4向胞外分泌，并停留于细胞膜，拟提高免疫原性。两种修饰基因都以基因组的构型引入，信号肽序列有一个内含子，而转膜基因含有两个内含子。表达之后，19个氨基酸的信号肽序列将被切除，而转膜基因的64个氨基酸将保留下来。表达之后，由于存在信号肽的作用，VP4被糖基化，分子量增至97kD左右。 我们将修饰后的VP4基因克隆至穿梭质粒中，与腺病毒载体共转染
By now, there are no efficient medicine or medical measures to treat rotavirus-induced diarrhea in infants. Therefore, rotavirus vaccine research is still the focus in this field. Rotavirus vaccine research involved attenuated live vaccines, subunit vaccines, genetic recombinant vaccines, DNA vaccines and viral vector vaccines. The purpose of these different kinds of vaccines is to elicit rotavirus specific immunity. As a gastrointestinal infective virus, local secreted antibodies play special and important roles to defend rotavirus infection. This paper studied VP4 gene modification, VP4 expression in prokaryotic and eukaryotic systems, and evaluated the immunogenicity of recombinant VP4 in mice and guinea pigse.VP4, the outer capsid protein and hamegglutinin of rotavirus, plays important roles in virus absorption and virulence. We choose rotavirus SA11 strain VP4 gene as the target gene. The length of SA11 rotavirus VP4 gene is 2363 base pairs (bp). Mature VP4 comprises 776 amino acids (aa), and the molecular weight is about 87kD. To improve the immunogenicity of VP4, we modified VP4 gene in two ways. In one way, a secretion signal peptide (SG, 139bp) derived from a mouse IgH chain was introduced into the 5" terminus of
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