论文标题:人胚食管上皮细胞永生化及其恶性转化过程中的染色体异常研究
Chromosomal alteration studies of human embryonic esophageal epithelial cells during immortalization and malignant transformation
论文作者 李晓昀
论文导师 苏敏,论文学位 硕士,论文专业 病理学
论文单位 汕头大学,点击次数 115,论文页数 51页File Size2471k
2001-05-01论文网 http://www.lw23.com/lunwen_60681757/ 染色体异常;永生化;恶性转化;HPV
Chromosomal alterations, Immortalization, Malignant transformation, HPV
背景与目的：现已证实几乎所有的人体恶性肿瘤都与染色体异常有关。因此，检测食管癌的染色体异常有助于阐明食管癌的癌变机制。HPV18E6E7基因转染人胚食管上皮细胞建立的永生化细胞株H5E973具有恶性变趋向，其61代细胞部分已恶性转化。H5E973细胞株和在H5E973培养传代后加入TPA诱导其恶性转化而建立的瘤细胞株LTPA为体外研究食管癌癌变机制提供了理想模型。本课题以这2个细胞株为实验对象，研究食管上皮细胞永生化及其恶性转化过程中的染色体变化规律，为进一步研究食管癌的分子细胞遗传学异常提供有价值信息。方法：体外传代培养H5E973和LTPA细胞，制备其中期染色体，用胰酶-Giemsa法进行G显带。分析H5E973 26、43、89代和LTPA 63代的染色体众数变化；对H5E973 26、89代和LTPA 63代进行G显带核型分析。此外，利用免疫组化和图象分析技术检测H5E97320、85代及LTPA74代细胞的HPV18 E6、E7蛋白的表达情况。结果：H5E973 26代、43代、89代众数分别为56～62、58～63、61～64，LTPA 63代众数为59～64。H5E973和LTPA细胞主要以超二倍体，尤其是亚三倍体为主。伴随传代次数增加，H5E973细胞众数右移，且亚三倍体也呈增多趋势。12、14、17和20号染色体数目增加和Y染色体的丢失在H5E973 26、89代和LTPA 63代均频繁出现。 在H5E973和LTPA主要发现了18个涉及1、2、4、5、6、7、8、9、10、13、14、19和21号染色体的基本可辨认的结构异常。其中der(4)，t(4；？)(q21；？)、der(5)，t(5；？)(p15；？)、der(10)，t(10；？)(q23；？)、der(13)，t(13；14)(13qer→cen→14qter)、der(14)，t(14；21)(q24；q11)、der(19)，t(19；1)(q12；p13)、21p+、der(？)，t(？；1)(？::1q11→1qter)、der(？)，t(？；1)(？::1q11→1q43)的频繁出现是H5E973 26代、89代及LTPA 63代的共同特征。del(7)(q31)在H5E973 26代、89代频发，但在LTPA 63 汕头大学医学院硕士学位论文代所分析的6 个核 型中去 未见王。der（），＊9；9）（PZ七ql 1）和der（4），t（4；2）（q21；ql2）主要见于H5E973 89代，der（9），t（9；）（qter一cen一qteo主要见于 LIPA63 代，i（7P）和 del（6）（且 1？）、der（13），t（13；13）（qter一 cen－qteo则主要见于 H5E973 89对和 LTPA63代，这 6不异常均较少出现于 H5E97326＊ 中。 H5E973 20． 85代和 LTPA 74代均有 HPVI 8E6、E7蛋白表达，但表达强度有所差异，其中 E6、E7蛋白表达在H5E973 85代的最强，在H5E973 26代相对较弱。上述三代E7蛋白表达均强于E6蛋白。结论上1．5E973、LTPA细胞主要以超二倍体、尤其是亚三倍体为主。H5E973细胞伴随代数增加出现染色体众数方移和亚三倍体增多。 2．12、14、17和 20号染色体数目增加和 Y染色体的丢失在H5E97326、89代和LI’hx 63代均频繁出现，提示其可能与食管上皮细胞永生化和恶性转化相关。 3．der（），t（4；？）（q21；？）、der（），t（5；？）（P15；？）、der（），t（10；？）（q23；？）。der（13），t（13；14） 3qter～cen一14qter）． der（14），t（14；21）（q24；qll）、der（19），＊19；1）（q12p13）、21扒、加r几＊？；1）（卜：lq＊一1呻） 加r（刀，＊t1）（卜：lqll 一lq43）的频繁出现是H5E973 26、89代及LT助 63代的共同特征，可 能在食管上皮细胞永生化和恶性转化中起重要作用。 4 der（9），t（9；9）（P24；ql）、de（），t（9；9）（gqter一 cen＋ gqter）。der（13），t（13二 3）（ 3 qter一cen 一13qter）、del（6）（q21？）、i（7P）和derO），tO上＊qZI；qlZ）由永生化阶段至恶性转化阶段呈现进行性积累，推测上述异常染色体与食管上皮细胞的恶性转化有关。 5．H5E973 20代、85代、LTPA 74代均有 E6、E7蛋白表达，但表达强度有所差异。E6、E7蛋白的表达在 H5E973 85代最强。上述三代E7受白表达均强于E6蛋白。
BACKGROUND AND AIMS: It has been proved that all malignant tumors are nearly correlated with chromosomal alterations. Investigations on chromosornal alterations of esophageal cancer would contribute to illuminate the pathogenesis of esophageal cancer. H5E973 was a HPVI8 E6E 7-immortalized human embryonic esophageal- epithelial cell line with the inclination towards malignant transformation,and part of its passage 61 cells has been malignantly ti-ansformcd.H5E973 and tumor cell line LTPA established by malignant transformation of H5E973 induced by TPA provided an ideal model for in vitro studying esophageal carcinogenesis. Investigation on chromosomal variation regularity of esophageal epithelial cells during immortalization and malignant transformation was performed on the two cell lines, so as to provide valuable information for further study of molecular cytogenetic abnormalities in esophageal cancer. METHORDS: H5E973 and LTPA cells were cultured and passaged, and metaphase spreads of the two cell lines were prepared and stained by G-banding. The present study analyzed the variation of chromosomal modal number among H5E973 passage 26,43,89 and LTPA passage 63, and performed the G-banding karyotype analysis on H5E973 passage 26,89 and LTPA passage 63. Moreover, irnmunohi stochemistry and image analysis techniques were used to detect the expression of I-JPV 18 E6 and E7 protein in I-15E973 passage 20,85 and LTPA passage 74. RESULTS: Modal number of H5E973 passage 26,43,89 and LTPA passage63 were 56-62,58-63,61 -64,59-64,respectively. Hyperdiploidy and hypotriploidy were dominant in the two cell lines, and in H5E973, the modal number moved right slowly and hypotriploidy increased with the increase of passage.The numerical increases of chromosomes 12,14,17,20 and loss of 6 chromosome Y often occurred in H5E973 passage 26,89 and LTPA passage 63. The present study mainly found 18 identified chromosomal structural alterations relating to chromosomes 1,2,4,5,6,7,8,9,10,13,14,19 and 21 in H5E973 and LTPA cells. Among these alterations, the frequent occurrence of der(4),t(4;?)(q2 1;?), der(5),t(5 ;?)(p 15;?), der( 1 0),t( 1 0;?)(q23), der( 13),t(1 3; 14)(l3qter 梸 cen 梸 l4qter), der(14),t(14;21)(q24;ql 1), der(19),t(19; 1)(q12;p 13), 2lp?, d.er(?),t(?; 1)(?:: 1q11 梸 1 qter), der(?),(?;i)Q?::lql I 梸 1q43) were the common characteristic of H5E973 passage 26,89 and LTPA passage 63. del(7)(q3 1) was common in H5E973 passage 26 and 89,but wasn抰 observed at the 6 kaiyotyoes analyzed in LTPA passage 63. der(9),t(9;9) (p24;ql 1) and der(4),t(4;2)(q21 ;q12)were mainly present in I-15E973 passage 89, der(9),t(9 ;9)(9qter梸 cen梸 9qter) was mainly present in LTPA passage 63, der(13),t(13;13)(l3qter 梸 cen 梸 l3qter), del(6)(q2 1?), i(7p), exhibited mainly in I-15E973 passage 89 and LTPA passage 63,while the 6 alterations were less found in H5E973 passage 26. There were the expressions of HPV 18 E6 and E7protein in all of 1-15E973 passage 20,85 and LTPA passage 74,but the expression intensity were different. The expressions of E6 and E7 proteins were the strongest in H5E973 passage 85, but were relatively weak in H5E973 passage 20, and the expression of E7 protein were stronger than that of E6 protein in every passage. CONCLUSIONS: 1. Hyperdiploidy and hypotriploidy were dominant in the
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